BCA蛋白定量試劑盒

 BCA蛋白定量試劑盒
 
產品簡介：
堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
BCA 法快速靈敏、穩定可靠，對不同種類蛋白質檢測的變異系數非常小。BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。在組織細胞蛋白提取過程中，常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑(DTT，巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中，若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可用BestBio貝博Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
 
產品組成：
 

使用方法：
A． 96孔酶標板測定：
1.       BCA工作液配制。根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。根據樣品數量，按體積試劑加體積試劑配制適量工作液，充分混勻。例如試劑加試劑，混勻，配制成工作液。工作液室溫小時內穩定。根據樣品數量，按體積試劑加體積試劑配制適量工作液，充分混勻。例如試劑加試劑，混勻，配制成工作液。工作液室溫小時內穩定。根據樣品數量，按體積試劑加體積試劑配制適量工作液，充分混勻。例如試劑加試劑，混勻，配制成工作液。工作液室溫小時內穩定。
2.       標準曲線繪制。取一塊酶標板，按以下表格數據加入試劑：

3.       振蕩混勻后，37℃放置30分鐘。
4.       用酶標儀測定A562，以不含BSA的光吸收值為空白對照。
5.     以蛋白含量(mg)為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。
6.       樣品測定：將待測蛋白樣品用去離子水稀釋至適當濃度，取20ml樣品，加入200ml BCA工作液，混勻后37℃放置30分鐘，然后以0號孔為對照，測定樣品吸收值A562。
7.       根據測得的吸收值，在標準曲線上即可查得樣品的蛋白含量。
8.       計算蛋白濃度：以查得的蛋白含量除以樣品體積20ml，再乘以相應的稀釋倍數即可得到待測樣品的實際濃度。
 
B． 比色皿測定
        按照比色皿規格，與以上方法相同，適當按比例增加各溶液體積即可。
 
儲存條件：
BCA試劑室溫保存。蛋白標準-20°C保存。        有效期：一年。
注意事項：
1.     在低溫條件或長期保存出現沉淀時，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發現細菌污染則應丟棄。
2.     因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應 的時間和溫度，否則如需精確測定，每次測定都需重做標準曲線。若需得到更為精確的蛋白濃度結果，每個蛋白梯 度和樣品均需做復孔。
3.     若測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色 沒有明顯變化，原因可能是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質。BCA蛋白濃度測定試劑盒對樣品中各種物質詳細的兼容性，參見附件BCA蛋白濃度測定兼容性表。
4.     試劑A 與試劑B 用應密閉保存。
5.      當試劑A 和B 混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失。
6.     使用溫箱孵育時，應注意防止因水份蒸發影響檢測結果。
 
附表：

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